### SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

本指南旨在为研究人员提供SV40转染人成骨细胞HFOB119的最佳培养条件，确保细胞在实验过程中的高质量和生物活性。

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称：** SV40转染人成骨细胞HFOB119

**生长特性：** 贴壁生长

**冻存条件：** 无血清冻存液（货号：C7001）

**培养体系：** DMEM/F12 + 03mg/ml G418 + 10% FBS

**传代方法：** 第一次建议 1:2 传代

**传代情况：** 每两天更换培养基

**备注：** 建议用无菌离心管收集培养基，以进行对比实验。如对比效果不佳，请考虑使用我们的完全培养基。

#### 二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应快速将其培养至良好状态，并封好瓶口以确保运输细胞的安全。使用75%酒精全方位喷洒细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入335℃、5% CO2培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存（建议使用40x、100x和200x的放大倍数各一张），前三天的照片为售后依据，如未提供照片视为收到状态良好。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代：**

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入335℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于335℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化，若细胞大多变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶并加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入335℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

**b、细胞冻存：**

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入。

**c、细胞复苏：**

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入335℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入335℃，5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，可按照以下方法处理：将培养瓶中的液体收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，并重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止。再离心，弃上清，重悬入1-2ml完全培养基后按1:2比例进行分瓶传代。

#### 五、售后条款

**细胞出现问题的重发情况：**

1. 运输途中遇到的问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，需重发。

2. 细胞污染应在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时大多数未存活者，需提供细胞状态照片重发。

4. 干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时内未开封出现污染，需重发。

5. 细胞活性问题需在7天内用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。

6. 收到当天及第2、3天请拍照，3天内未告知视为产品合格。

7. 对于4-7天内出现的问题需提供收到细胞前三天的照片及详细操作步骤，由技术人员判断重发责任。

**不予重发的情况：**

1. 客户自身造成的细胞污染，不重发。

2. 客户错误操作导致细胞状态不佳，不重发。

3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不重发。

4. 未提供细胞培养前三天的照片影响问题处理，不重发。

5. 培养时经其他处理的不予重发。

6. 收到细胞后两天内未反馈状态，不重发。

7. 具体情况视实际而定。