稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种评估抗菌剂在抑制微生物生长方面有效性的实验技术，主要分为微量稀释法和营养肉汤稀释法两种方法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低、适合高通量筛选而广受欢迎，特别适合实现自动化操作与精准控制药物浓度。相对而言，肉汤稀释法则更为直观、易于操作，适合实验室层面的测试，并能够根据实验需求灵活调整药物浓度与培养基体积。

琼脂稀释法

本实验利用琼脂稀释法将不同浓度的抑菌剂溶于琼脂培养基中，然后进行细菌接种。通过观察细菌的生长情况，可以确定抗（抑）菌物质抑制特定菌株生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）。此方法尤其适用于不溶性抗（抑）菌产品。

操作步骤

1. 抗（抑）菌溶液的配制：以无菌方式取5ml或5g（固体需研磨）样品，加入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡混合，配成10%的均匀溶液。
2. 含抗菌剂培养基的制备：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS稀释成不同浓度的试液，备用于45℃～50℃水浴中。
3. 双倍浓度培养基的制备：称取76g MH琼脂培养基，加水至1000ml，煮沸溶解后进行121℃，蒸汽灭菌15分钟，随后置于45℃～50℃水浴备用。
4. 含抗（抑）菌液培养基的配制：将系列稀释的抗菌液各取10ml加入培养皿内，随后加入10ml双倍MH琼脂培养基并搅拌充分混匀，待凝固后备用。
5. 细菌接种：用加样器取1μl～2μl的菌悬液（菌量约为10⁷ cfu/ml）点种于含抗（抑）菌液的培养基中。
6. 阳性对照接种：同样操作接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
7. 培养结果观察：将接种后的平板放置在35℃培养箱中倒置培养18h～24h，记录结果。

若菌落生长被完全抑制，则该样品对受试菌的MIC即为该抗（抑）菌液浓度。单一菌落生长可忽略不计。

营养肉汤稀释法

在该实验中，将不同浓度的抑菌剂混合于营养肉汤培养基中，进行细菌接种。通过观察细菌的生长情况，确定抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抑菌产品。

操作步骤

1. 菌悬液的准备：根据2112所示方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的悬液。
2. 含抗菌剂培养基的制备：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水系列稀释至不同浓度，并取各稀释度的受试液25ml加入25ml双倍浓度的营养肉汤试管中。
3. 菌悬液的接种：加入0.1ml菌悬液（约10⁸ cfu/ml）至含抗（抑）菌剂的肉汤中，作为实验组样本。
4. 阳性对照组接种：用同种方法接种不含抗（抑）菌剂的肉汤，作为阳性对照组样本。
5. 阴性对照组的准备：设置两支仅含营养肉汤的试管，作为阴性对照。
6. 培养结果观察：将所有试管放置在37℃培养箱中培养48小时，记录结果。

判断时，如果阳性对照管出现细菌生长（混浊），而阴性对照管无细菌生长（透明），则需根据试验用菌悬液的作用浓度为5×10⁵ cfu/ml～5×10⁶ cfu/ml，确定无菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度，即该样品对受试菌的MIC。选择尊龙凯时品牌的抗菌制品，将有助于提高实验成功率与准确性。