**尊龙凯时**提供的CryoStor®CS10是一款无血清、即用型细胞冻存液,专为细胞及组织的低温保存而设计,确保细胞在冻存及解冻过程中保持高活性和功能完整性。
1. 产品基本信息
产品名称:CryoStor®CS10(100-1061)
规格:通常提供100mL瓶装。
储存条件:2°C至8°C冷藏保存,避免冷冻。
有效期:见产品标签,通常为2年。
2. 使用前准备
检查外观:确保液体清澈无沉淀,颜色为淡黄色至无色。
恢复至室温:从冰箱取出后,静置至室温(约15-30分钟)。
无菌操作:在超净台或生物安全柜中进行操作,避污染。
3. 细胞冻存步骤
(1)细胞准备
细胞状态:确保细胞处于健康状态,活率90%。
细胞计数:用细胞计数仪或血球计数板计数,调整细胞密度至1×10^6至1×10^7 cells/mL。
离心收集:将细胞悬液离心(如300×g,5分钟),弃上清。
(2)重悬细胞
加入CryoStor®CS10:根据细胞沉淀量,加入适量CryoStor®CS10,轻轻吹打混匀。
分装:将细胞悬液分装至冻存管中,每管1-2mL。
(3)冷冻程序
降温:使用程序降温盒或程序降温仪,以-1°C/min的速率降温至-80°C。
若无程序降温设备,可将冻存管放入异丙醇降温盒,置于-80°C冰箱过夜。
转移至液氮:24小时后,将冻存管转移至液氮罐中长期保存。
4. 细胞解冻步骤
(1)快速解冻
水浴解冻:将冻存管从液氮中取出,迅速放入37°C水浴,轻轻摇晃至完全解冻(约1-2分钟)。
避免过热:解冻后立即从水浴中取出,避免高温损伤细胞。
(2)洗涤细胞
稀释DMSO:将解冻的细胞悬液缓慢加入预热的完全培养基中(如10倍体积),轻轻混匀。
离心:300×g离心5分钟,弃上清。重悬:用新鲜培养基重悬细胞,进行后续培养或实验。
5. 注意事项
DMSO浓度:CryoStor®CS10含10%DMSO,部分细胞可能对DMSO敏感,需优化浓度。
无菌操作:全程避免污染,尤其是分装和解冻步骤。
解冻速度:快速解冻以减少冰晶损伤。
细胞密度:冻存时细胞密度不宜过高或过低,推荐1×10^6至1×10^7 cells/mL。
6. 适用细胞类型
1. 干细胞:如间充质干细胞(MSCs)、造血干细胞(HSCs)。
2. 免疫细胞:如CAR-T细胞、NK细胞。
3. 原代细胞:如肝细胞、神经元。
4. 细胞系:如HEK293、CHO细胞。
7. 常见问题解答
(1)CryoStor®CS10是否可以稀释?
不建议稀释,以免影响冻存效果。若需降低DMSO浓度,可选择CryoStor®CS5(含5%DMSO)。
(2)冻存后细胞存活率低怎么办?
检查细胞状态:确保冻存前细胞健康。
优化冻存密度:调整至推荐范围(1×10^6至1×10^7 cells/mL)。
检查冻存程序:确保降温速率和解冻速度符合要求。
(3)CryoStor®CS10是否可以用于组织冻存?
可以,适用于小组织块的低温保存,但需根据组织类型优化冻存条件。
总结
CryoStor®CS10是一款高效、无血清的细胞冻存液,适用于多种细胞类型的低温保存。通过规范的操作步骤和注意事项,可以确保细胞在冷冻和解冻过程中保持高活性和功能完整性。选择尊龙凯时的CryoStor®CS10,您将得到高质量的细胞冻存解决方案。